Microscopio de campo oscuro

De igual manera, al observar el brillo de las estrellas en el cielo nocturno o al iluminar con una linterna se vuelven visibles porque reflejan o difractan la luz, las muestras observadas se ven blancas y brillantes sobre un fondo oscuro. La iluminación de campo oscuro, se puede realizar mediante luz transmitida (trans – iluminación) o con luz incidente (epi – iluminación).

En el primer caso, para lograr el efecto deseado, se debe bloquear la parte central del haz de luz que suele pasar alrededor y a través de la muestra iluminada por haces oblicuos. La forma más sencilla, consiste en colocar un filtro circular opaco bajo el condensador del microscopio.

Microscopio Olympus_BX 51

Microscopio biológico Olympus BX51 de luz transmitida y reflejada. Posee un condensador universal de 8 posiciones, que permite una observación continua sobre todos los rangos de magnificación (1,25x-100x) para uso en campo claro, campo oscuro, contraste de fase, polarización y contraste de fase diferencial DIC (Nomarski).

Este procedimiento es adecuado en objetivos de 10x a 40x; el diámetro del filtro circular debe tener entre 16 a 18 mm. para objetivos de 10x con AN de 0.25. En objetivos de 20x o 40x con AN de 0.65, el diámetro del filtro circular debe oscilar entre 20 a 24 mm. Con iluminación de luz incidente o iluminación oblicua se emplea un filtro en forma de media luna se obtienen imágenes en relieve.

El método más apropiado, consiste en utilizar un condensador que mejore la resolución formando un cono hueco de luz siendo oscuro el centro que incide lateralmente sobre la muestra y los haces de luz que son difractados o reflejados por la estructura del espécimen que penetran en la lente del objetivo permitiendo que la muestra aparezca como un objeto luminoso sobre un fondo oscuro.

Aplicaciones

Estudio de especímenes no coloreados, como microorganismos acuáticos, ovocitos, células en cultivo con índices de refracción que oscilen entre 1,2 a 1,4 sin diferencia aparente con el índice de 1,3 de la solución acuosa en la cual se encuentran.

Observación de células móviles, como el Treponema pallidum, una espiroqueta causante de la sífilis.

Estudio de procesos fisiológicos como mitosis y migración celular.

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